Questions-réponses ED n° et 2 de biologie cellulai re PACES - 2010/20111Introduction et Matrice extracellulaire- Dans quelles situations utiliser l'une ou l'autre des différentes techniques d'isolement descellules (centrifugation, différence d'adhérence, FACS.

« Questions-réponses ED n°1 et 2 de biologie cellulaire PACES – 2010/2011 Introduction et Matrice extracellulaire - Dans quelles situations utiliser l’une ou l’autre des différentes techniques d'isolement des cellules (centrifugation, différence d'adhérence, F ACS...) Le choix de l’utilisation de ces techniques repose sur les propriétés générales ou particulières des cellules à isoler et sur le principe de la techniqu e concernée.

La centrifugation permet de séparer les cellules en fonction de leur densité.

Cette technique s’applique bien aux cellules sanguines, qui sont pa r ailleurs faciles à manipuler en suspension (les cellules n’adhèrent normalement pas les unes a ux autres) La différence d’adhérence permet de séparer des cel lules qui présentent des propriétés d’adhérence particulières : certaines cellules sang uines (monocytes-macrophages) ou épithéliales (cellules souches épidermiques qui adh érent plus que le reste des kératinocytes du fait d’une expression plus forte de certaines mo lécules d’adhérence) ; Le tri par FACS utilise un marquage fluorescent qui peut être spécifique d’un type cellulaire particulier.

C’est le cas de l’utilisation d’antico rps spécifiques de certaines protéines de membrane plasmique, dont l’expression est spécifiqu e d’un type cellulaire particulier, ou d’un état de différenciation particulier au sein d’un ty pe cellulaire donné.

Grâce à ces marqueurs, le FACS permet une purification aisée de populations e t sous-populations cellulaires pour lesquels on dispose des marqueurs appropriés.

- Le SVF est-il toujours utilisé en culture cellula ire ? Dans quel(s) cas ne l’est-il pas ? Le SVF est très largement utilisé en culture cellul aire, comme source commode de facteurs de croissance indispensables à la pousse des cellules.

Il ne peut pas l’être si l’objet du travail expérimental sur les cellules est d’explorer le méc anisme d’action des facteurs de croissance, car on ne connaît pas la composition précise du SVF en ces facteurs.

Il faut alors utiliser un milieu défini, ne comportant pas de SVF, mais contenant le ou les fac teurs de croissance à étudier en concentrations connues.

-Concernant le FACS : où est la cathode? l'anode? Question sans objet - Que signifie «les cellules atteignent la confluen ce»? Ce terme s’applique aux cultures de cellules adhére ntes.

Ces cellules sont mise en culture dans dans des boites.

Elles adhèrent au fond de la boite (sur une matrice placée au fonds de la boite, ou que le s cellules sécrètent).

Elles se multiplient et devien nent jointives.

Au bout d’un certain temps de cultu re, les cellules couvrent toute la surface de la boite.

La culture est alors à confluence.

Du fait de l’inhibition de contact entre les cellules la proli fération cellulaire s’arrête.

- La lame basale fait-elle partie de la matrice ext racellulaire? Oui - Concernant le tropocollagène, est-ce que tous les radicaux R de la séquence répétitive GLY- PRO-X s’orientent vers l’intérieur de la triple hél ice ou seule la GLY est concernée? Seule la glycine est concernée - Est-ce que les liaisons diallysine, aldimine et a ldol sont toutes considérées comme des liaisons inter-chaines? La liaison diallysine concerne les liaisons interch aines de la molécule de tropocollagène, tandis que les deux autres unissent entre elles les molécules de tropocollagène pour former le collagène - Est-ce que la liaison diallysine est une liaison permettant de lier les chaines alpha du tropocollagène entre elles.

Est-ce que les liaisons aldimine/aldol sont impliquées dans la liaison de plusieurs chaînes de tropocollagène entr e elles pour former le collagène? Voir réponse précédente - Quelle différence entre liaisons de type aldimine et aldol?. »